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  如何进行色谱柱的维护?

  ①建议检测前样品和流动相进行过滤。

  ②建议每天做完样品后及时进行清洗。

  ③常规检测：测试完后直接把色谱柱反向连接采用90%有机相冲洗45min，最后保存在纯甲醇或纯乙腈中。

  ④使用缓冲盐条件：

  a.等度条件：使用缓冲盐之前和之后都用过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min。

  b.梯度条件：使用缓冲盐之前与初始流动相组成相同的过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min。

  注意：

  1.过渡流动相是指有机相和水相比例与分析流动相相同比例，只是不含有缓冲盐。

  2.缓冲盐冲洗干净后，采用90%有机相反向冲洗60min，最后保存在纯有机溶剂中。

  3.使用缓冲液不能存留色谱柱中过夜。

  2

  氨基柱在进酸性样品时，很伤柱子，

  如使用一段时间后，柱效较低，峰形改变

  如何恢复?

  用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨)，之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1%。

  3

  液相色谱中峰出现拖尾

  或出现双峰的原因是什么?

  ①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

  ②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子。

  ③可能柱超载，减少进样量。

  4

  HPLC灵敏度不够的主要原因

  及解决办法是什么?

  ①样品量不足，解决办法为增加样品量。

  ②样品未从柱子中流出，可根据样品的化学性质改变流动相或柱子。

  ③样品与检测器不匹配，根据样品化学性质调整波长或改换检测器。

  ④检测器衰减太多，调整衰减即可。

  ⑤检测器时间常数太大，解决办法为降低时间参数。

  ⑥检测器池窗污染，解决办法为清洗池窗。

  ⑦检测池中有气泡，解决办法为排气。

  ⑧记录仪测压范围不当，调整电压范围即可。

  ⑨流动相流量不合适，调整流速即可。

  ⑩检测器与记录仪超出校正曲线，解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

  5

  做HPLC分析时，柱压不稳定

  原因何在?如何解决?

  ①泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理。

  ②比例阀失效，更换比例阀即可。

  ③泵密封垫损坏，更换密封垫即可。

  ④溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法。

  ⑤系统检漏，找出漏点，密封即可。

  ⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的。