一、洗涤

1、玻璃器皿的洗涤

1.1 浸泡

新瓶使用前应先用自来水简单刷洗,然后用稀盐酸溶液(5%)浸泡过夜;培养后的玻璃器皿用后要立即浸入清水中;注意:让水能完全进入瓶皿中,不应留有气泡。

1.2 刷洗

浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗涤剂洗涤(宜选用软毛刷和优质的洗涤剂,如高级洗衣粉或洗洁精),绝对不能使用含沙粒的去污粉!洗刷时特别注意洗刷瓶角部位。

1.3 浸泡

器皿要充满清洁液,勿留气泡.浸泡时间不应少于6小时;一般应浸泡过夜。

1.4 冲洗

刷洗和浸酸后都必须用水充分冲洗,使之不留任何残迹.冲洗宜用洗涤装置,以保证冲洗效果,如用手工操作,每瓶都得用水灌满,倒掉,重复十次以上,最后再用蒸馏水漂洗2～3次,凉干备用。

2、胶塞的清洗

新购置的胶塞先用自来水冲洗干净后,再做常规处理。

3、塑料器皿的清洗

目前我国培养使用的塑料器皿主要是从国外购置的,是一种无毒并已经消毒过灭菌密封包装的商品.用时,只要打开包装即可,是一次使用性物品.必要时,用后经无菌处理后 ,尚可反复使用2～3次,但不宜过多.再用时仍然需要清洗和灭菌处理.塑料器皿质地软,不宜用毛刷刷洗,造成清洗困难.为此使用中一是防止划痕,二是用后要立即浸入水中,严防附着物干结;如残留有附着物,可用脱脂棉清拭掉,用流水冲洗干净,凉干、再用2%NaOH液浸泡过夜,用自来水充分冲洗,然后 用5%盐酸溶液浸泡30分钟,最后用自来水冲洗和蒸馏水漂洗干净,凉干后备用。

二、消毒

1.紫外线消毒

紫外线直接照射法很方便,效果好,是目前各实验室常用的消毒法。

【适用范围】空气、操作台表面和一些不能使用其它方法进行消毒的培养器皿(如塑料培养皿、培养板等)

【要求】(1)培养室的紫外线灯应距地面2.5米,使每平方厘米有0.06微瓦能量的照射,才能发生有效的消毒作用.(2)由于各种细菌对紫外线的敏感性不同,所用照射时间和剂量也不同。

【缺点】(1)产生臭氧,污染空气,对身体有害;(2)射线照射不到的部位起不到消毒作用,故消毒时,物品不宜相互遮挡。

【注意】 有人习惯于边照射边进行实验操作,这样不好,一是紫外线对细胞、试剂和培养液都有不良影响,二是对人体皮肤也有伤害。

2.湿热消毒

湿热消毒即高压蒸汽消毒,是最有效的一种方法。

【适用范围】布类、胶塞、金属器械、玻璃器皿及某些培养用液。

【要求】：培养用液、橡胶制品 10磅10分钟 。布类、玻璃制品、金属器械等 15磅20分钟。

3.滤过消毒

【适用范围】 大多数培养用液,如人工合成培养液、血清、酶溶液等(这些在高温下会发生变性,失去其功能,必须采用滤过法除菌。

【常用滤器】 Zeiss滤器、微孔滤膜滤器及各种不同规格的一次性滤器.常用孔径0.22um滤膜过滤一般用液即可。

【注意】

(1)滤膜用后丢弃,滤器清洗也比较方便,先用毛刷蘸洗涤剂刷洗干净,用自来水冲洗后,再用蒸馏水冲洗,凉干即可;

(2)用前再装上一张新的滤膜;

(3)消毒时旋钮不要扭太紧,凡与空气接触部位都用纸包装好,以保证消毒时的效果;

(4)消毒后,在无菌环境中立即将旋钮扭紧;

(5)滤过少量液体时,用一种能安装在注射器上的小滤器,使用相同的滤膜,滤过时把滤过物装入注射器针管内,压出过滤物注入无菌容器中即.