冻存管的使用是一门学问，并不是打开液氮罐、放入冻存管、关上液氮罐这样简单的三部曲可以完成的。科学正确地使用冻存管，可以避免样本的损失，并保护试验人员的安全。

Greiner 冻存管有IATA航空运输协会标准测试证书，常规储存细胞培养物，组织样品，微生物样品(如病毒，细菌，酵母，真菌，孢子等)，人源或动物源其它生物样品(如血液，血清，精液，抗体，RNA, DNA和蛋白样本)，不适合存储再生医学样本。

冷冻步骤

用预热的PBS溶液洗涤细胞，吸取溶液，含有胰蛋白酶和EDTA的溶液覆盖细胞(薄薄的液层足够，胰蛋白酶和EDTA的浓度需要根据细胞系确定)。

37℃孵育细胞3-5分钟。

细胞从底部脱离之后，终止孵育，加入含有血清的培养基，用移液器轻轻地悬浮细胞。

离心细胞悬液(500 x g, 5分钟)，用含有血清的培养基重新悬浮。

细胞计数。

离心细胞悬液(500 x g, 5分钟)，去除上清液，用适量体积的含有血清的培养基重新悬浮细胞。

以1:1体积比混合细胞和冻存液(60%培养基，20%胎牛血清，20% DMSO)，然后转移到Cryo.sTM冻存管中。冻存的细胞密度为 1-5×106 个/毫升。

含有细胞的Cryo.sTM冻存管建议以−1 K / min 的速率降温，可以将冻存管置于−70℃含有异丙醇的容器中。如果Cryo.sTM冻存管存储其他样品，可以直接放置在−20℃，−70℃或者液氮的气相。为了确保样品冷冻均匀，4 mL和5 mL的Cryo.sTM冻存管需要先置于在−20℃冰箱过夜，然后再转移到−70℃或者液氮的气相。

然后转移Cryo.sTM冻存管到液氮罐。为了避免污染(如支原体)和安全考虑，请将Cryo.sTM冻存管置于液氮的气相，切勿置于液相。

解冻步骤

从液氮罐取出冻存的细胞后立即置于37℃水浴摇晃Cryo.sTM冻存管1-2分钟。解冻过程需要越快越好。

转移解冻的细胞于15 mL离心管，立即用大量的含有血清的细胞培养基混匀。

500 x g离心细胞5 分钟，去除上清液，用适量的含有血清的细胞培养基重新悬浮细胞，然后转移到细胞培养瓶。

按照建议的细胞浓度接种。

接下来的12小时细胞进入静默期。

间隔24小时和48小时更换培养基

如果细胞感染了新冠病毒，也可以参考以上步骤进行冷冻存储和解冻的操作。